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RIPA 组织/细胞裂解液 CC440070

产品编号: CC440070

产品包装: 100ml

产品价格: 200元

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  • 产品简介
  • 使用说明
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规格:100ml
       本产品配有一支PMSF(100mM,1.5ml)
 
保存:RIPA裂解液4℃保存,PMSF-20℃保存。
 
产品简介:
    RIPA组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜)。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
 
使用说明:
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每1ml RIPA加入10ul PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,混匀备用(PMSF现用现加)。
 
1. 样品前处理:
   a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
 
   b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后反应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5-10×105细胞/管,然后再裂解。
 
   c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
 
2. 后处理:
   将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
 

 

注意事项:
1. 使用本裂解液可以裂解细胞核,释放出核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。
 
2. 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
 
3. 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。