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Sybr Green荧光染料法定量PCR(2…

产品编号: CC31101/CC31102

产品包装: 1ml(40次)/1ml×5(…

产品价格: 320元/1300元

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2×Sybr Green qPCR Mix (Sybr Green荧光染料法定量PCR)

储存:
-20 ℃ 避光保存至少 6 个月,使用前充分融解混匀。短期使用可放在 4 ℃,避免反复冻融。

制品说明:本制品本制品是采用 SYBR® Green I 嵌合荧光法进行 Real Time PCR 的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA 聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA 和 SYBR® Green I等试剂预混成一种适合 Real Time PCR 反应检测用 2×Premix Type 试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。本品采用全新的 Hotmaster Taq DNA聚合酶,该酶不同于一般 Hot-start 酶之处在于,一般的 Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而 Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭 Hotmaster TaqDNA 聚合酶的底物结合位点,温度低于 40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少 PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量 PCR 反应的精确性。

注意事项:
1. 本制品不含参比染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,配套ROX产品货号为CC318  Rox Reference Dye。
2. 本制品含SYBR® Green I 强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。
4. 本制品含有4 mM MgCl2(反应体系终浓度是2 mM Mg2+),可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。



荧光定量 PCR 实验常见问题和解决方案

A1: 无信号值出现
Q1:
1. 反应循环数不够。一般都要在 35 个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至 45cycles),但高于 45 个循环会增加过多的背景信号。
2. 检测荧光信号的步骤有误。一般 SG 法采用 72℃延伸时采集,Taqman 法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
3. 引物或探针降解。可通过 PAGE 电泳检测其完整性。
4. 引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
5. 模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
6. 模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

A2: CT 值出现过晚
Q2:
1. 扩增效率低,反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。
2. PCR 各种反应成分的降解或加样量的不足。
3. PCR 产物太长。一般采用 100-150bp 的产物长度,一般不超过 500bp。

A3: 标准曲线的线性关系不佳
Q3:
1. 加样存在误差,使得标准品不呈梯度。
2. 标准品出现降解。应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。
3. 引物或探针不佳。重新设计更好的引物和探针。
4. 模板中存在抑制物,或模板浓度过高。