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RNAblood超纯全血总RNA快速提取试…

产品编号: CC9714

产品包装: 20T/50T

产品价格: 410元/670元

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  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片
产品编号:CC9714
包装单位:20次、50次
适用范围:适用于快速提取全血高纯度总 RNA
试剂盒组成、储存、稳定性:﹢

试剂盒组成
保存
20次
50次
10X红细胞裂解液RLB
室温
10 ml
25 ml
裂解液 RL
4℃避光
25 ml
50 ml
去蛋白液RE
室温
15 ml
25 ml
漂洗液RW
室温
5 ml
10 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
RNase-free H2O
室温
10 ml
10 ml
70%乙醇
室温
4ml RNase-free H2O
9ml RNase-free H2O
第一次使用前按说明加指定量乙醇
RNase-free吸附柱RA
室温
20个
50个
收集管(2ml)
室温
20个
50个

本试剂盒在室温储存 12个月不影响使用效果。
 
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液 RL可以常温运输,收到后4℃避光保存

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、 PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

产品介绍:改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活 RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3. 独有的 RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。
4. 多次漂洗去蛋白过程,提取 RNA纯度更高。
5. 有效的去除了 5S在总 RNA中含量,提高了纯度。
 
注意事项:
1.         第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2.           所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf5414C或者类似离心机。
3.         裂解液RL和蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,需用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.       考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,用户使用前需要自备氯仿。
5.         常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6.         检测OD260和OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7.       加入裂解液RL匀浆后,加氯仿前,样品可在-60℃-70℃保存一个月以上。
8.         关于DNA的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1)      选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNaseⅠ处理。
4) 在步骤去蛋白液RE漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNaseⅠ消化处理。
 
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
²        提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇!
²        使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。
1.       在适合大小的RNase free离心管中加入1体积(0.5-1.0ml)加入各种抗凝剂新鲜血液(颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB,颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀。
病人血样中白细胞数量可能大幅增加或者减少,应该适当增加或减少处理量。
2.     室温放置10分钟(期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞)。
如果RNA降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。
3.       12,000rpm离心20秒,倒弃红色上清,并小心的尽可能多的吸弃上清(注意不要吸到管底的细胞团),留下完整的管底白细胞团。
离心后在管底应该见到白色的白细胞团,也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起,但是如果看到的是大部分的红色细胞团,说明红细胞裂解很不充分,应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤2,3。
上清尽可能的吸弃,残留过多会稀释裂解液,造成裂解结合异常,产量纯度降低。
4.     涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀完全松散重悬,加入1ml的RL,用移液枪反复吹打来裂解细胞。
5.     将匀浆样品剧烈震荡混匀,在15-30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
6.     每1ml RL加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖,剧烈震荡15秒并室温下放置2分钟。
7.       于4℃12,000rpm离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的60%,把水相转移到新管中,进行下一步操作。
8.       加入等体积70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内)。
9.       12,000rpm离心45秒,并弃掉废液,将吸附柱重新套回收集管。
10.    加500ul去蛋白液RE,12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
11.    加入500ul漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
12.    加入500ul漂洗液RW,12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
13.    将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
14.    取出吸附柱RA,放入一个RNase-free心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80ul RNase-free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。
    洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于30ul,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。