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RNAliquid超速全血(液体样本)总…

产品编号: CC9715

产品包装: 20T/50T

产品价格: 420元/680元

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  • 产品简介
  • 使用说明
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 RNAliquid超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒

产品编号:CC9715
包装单位:20次、50次
适用范围:适用于快速提取全血(液体样本)高纯度总 RNA
试剂盒组成、储存、稳定性:﹢

试剂盒组成
保存
20次
50次
裂解液RLS
4℃避光
25ml
50ml
去蛋白液RE
室温
15ml
25ml
漂洗液RW
室温
5ml
10ml
 
 
第一次使用前按说明加指定量乙醇
 
RNase-free H2O
室温
10ml
10ml
70%乙醇
室温
4ml RNase-free H2O
9ml RNase-free H2O
 
 
第一次使用前按说明加指定量乙醇
 
RNase-free 吸附柱RA
室温
20个
50个
收集管(2ml)
室温
20个
50个

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
 
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2. 不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液 RLS 可以常温运输,收到后4℃避光保存。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶,然后总 RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA 可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3. 独有的 RLS 裂解液配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。
4. 多次漂洗去蛋白过程,提取 RNA 纯度更高。
5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。
 
注意事项:
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
3. 裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,用户使用前需要自备氯仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7. 加入裂解液RLS后,加氯仿前,样品可在–60℃-70℃保存一个月以上。
8. 关于DNA的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大,如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
4) 在步骤去蛋白液RE漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNase I 消化处理。

 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指定量乙醇!
1. 每0.25ml液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75ml裂解液RLS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75ml裂解液RLS。裂解液RLS和液体样品的终体积比总是3:1。
2. 将样品剧烈震荡混匀,在15-30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 每0.75ml裂解液RLS加0.2ml氯仿,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。
4. 于4℃12,000rpm离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RLS体积的70%,把水相转移到新管中,进行下一步操作。
5. 加入1倍体积70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内)。
6. 12,000rpm离心45秒,弃掉废液,将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500ul去蛋白液RE,12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
8. 加入500ul漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
9. 加入500ul漂洗液RW,12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
10. 将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50ul RNase free water(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟, 12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30ul RNase free water,离心1分钟,
合并两次洗脱液。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要 RNARNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于 3030μμll,体积过小降低 RNARNA 洗脱效率,减少 RNA产量。