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PLANTeasy植物RNA提取试剂  CC97…

产品编号: CC9731

产品包装: 20ML/100ML

产品价格: 200元/650元

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  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

适用范围:适用于富含多糖、多酚植物总RNA抽提
 
产品储存:室温运输,4℃保存,可保存6个月
 
产品介绍:PLANTeasy试剂可从植物组织,特别是富含多酚或淀粉的植物组织中,(如马铃薯块茎,白松松针或嫩苗,和西红柿叶等),提取高纯度的总RNA。每100ml可处理 100mg组织200次,处理5g组织4次。

 

操作方法:
准备试剂:液氮,研钵,无RNase离心管,5M NaCl,氯仿,异丙醇,75%乙醇,无RNase水。
 
样品处理:
a. 先将无RNase离心管置于干冰中再放入研磨好的冷冻的组织样品。
b. 准备新鲜植物组织,在液氮中研磨成粉状,如果是干种子,可在室温研磨。
c. 处理过的植物材料应一直保持置于-70℃冷冻保存,直至加入提取试剂并悬浮。
 
1. 小规模提取操作步骤:(样品<0.1g,使用小规模提取方法):
1) 取不多于0.1克冷冻的研磨过的植物组织,加0.5ml提取试剂(4℃),振荡至彻底混匀。
2) 室温放置5分钟。注意:平放离心管,使表面积最大。
3) 室温12,000rpm离心1分钟,上清转入新的无RNase离心管。
4) 加0.1ml 5M NaCl,温和混匀。再加0.3ml氯仿,上下颠倒混匀。
5) 4℃ 12,000rpm离心10分钟,取上层水相转入新的无RNase离心管。
       如果提取富含多糖多酚的植物,可以加入0.3ml氯仿再抽提一遍。
6) 加与所得水相等体积的异丙醇,混匀,室温放置10分钟。
7) 4℃ 12,000rpm离心10分钟。弃掉上清,注意不要倒出沉淀。加1ml 75%乙醇。(沉淀可能很难看见,应小心操作。)
8) 4℃ 5,000rpm离心3分钟。倒出液体,注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集,然后用枪头吸出,室温晾干2-3分钟。
9) 加50ul无RNase水,反复吹打混匀以充分溶解RNA。如有絮状物,可室温12,000rpm离心1分钟,取上清转入干净的无 RNase 离心管中。-70℃保存。
 
2. 大量提取操作步骤(样品>0.1g到5g,使用大量提取方法):
1) 每1克冷冻的研磨过的植物组织,加5ml试剂,振荡至彻底混匀。
2) 室温放置5分钟。注意:平放离心管,使表面积最大。
3) 4℃ 10,000rpm离心1分钟,上清转入新的无RNase离心管。每10ml上清加2ml 5M NaCl,混匀。
4) 每10ml上清加6ml氯仿,上下颠倒混匀。
5) 4℃ 10,000rpm离心15分钟,取上层水相转入新的无RNase离心管。
如果提取富含多糖多酚的植物,可以加入6ml氯仿再抽提一遍。
6) 测量所得水相体积,加0.9倍体积异丙醇,混匀,室温放置10分钟。
7) 4℃ 10,000rpm离心15分钟。弃掉上清,注意不要倒出沉淀。加5-10ml75%乙醇。
8) 4℃ 5,000rpm离心5分钟。小心倒出液体,注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集,然后用枪头吸出弃掉,室温晾干3-5分钟。
9) 根据沉淀大小加无RNase水,反复吹打混匀充分溶解RNA(如每1g叶片可加200ul水)。如有絮状物,可室温12,000rpm离心1分钟,取上清转入干净的无RNase离心管中,-70℃保存。
 
问题与解决方法

问题
评论与建议
 
RNA得率低
* 样品研磨不充分-建议:将样品充分研磨成粉末
* 样品未与试剂充分混合-建议:充分振荡,彻底混合样品
* 样品RNA含量少-建议:每ml提取液加1ul glycogen(20ug/ul)有助RNA沉淀
* 尼龙膜堵塞-建议:可使用纱布过滤
RNA降解
* 样品储存方法不当-建议:样品收集后或需长期保存时应置于-70℃
* 加入试剂前样品已解冻-建议:样品应一直保持-70℃直至加入试剂并悬浮
A260/A280比率低
* RNA溶于水-建议:将RNA溶于10mM Tris-HCl(PH7.5)进行紫外检测
废弃物有异味
* 本试剂中含β-巯基乙醇-建议:废弃物用水稀释,加几毫升3%双氧水,过夜,用碳酸氢钠调PH降低酸性