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RNAclean RNA清洁纯化试剂盒  CC…

产品编号: CC9734

产品包装: 20T/50T

产品价格: 320元/640元

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  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

产品编号:CC9734                          
包装单位:20次、50次
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
20
50
结合液RC
室温
8ml
20ml
漂洗液RW
室温
5ml
10ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
RNase-free H2O
室温
10ml
10ml
RNase-free吸附柱RA
室温
20个
50个
收集管(2ml)
室温
20个
50个

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
 
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:本试剂盒使用离心吸附柱硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。在高盐条件下RNA与硅胶吸附膜高效、专一地结合,同时最大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等,在低盐条件下,RNA被洗脱。可处理的RNA样品量可高达50μg。本试剂盒用于从酶反应液(DNase处理、蛋白酶处理、RNA标记等)中纯化回收RNA,也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。纯化的总RNA没有蛋白的污染,所得的RNA可用于Northern blot、Dot blot、mRNA提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。

 

操作步骤:
提示:
²        第一次使用前请先在漂洗液 RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
²        以下所有步骤均可以在室温进行,但是应该迅速操作,减少RNA降解机会。
1. 冰上RNA样品加入RNase-free water补足至100μl,加入350μl溶液RC,混匀。
 
2. 加入250μl无水乙醇,混匀,无需离心。
 
3. 上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内),4℃ 12,000 rpm离心45秒,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新套回收集管。
如需去除DNA微量残留,可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化,详见附录。
 
4. 加0.5ml漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇!),4℃ 12,000rpm离心45秒,弃废液。
 
5. 加0.5ml漂洗液RW,4℃ 12,000rpm离心45秒,弃废液。
 
6. 4℃ 13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
7. 取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心一分钟,合并两次洗脱液。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNARNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于30μl,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
 
附录:DNase I柱上消化
本试剂盒还可以进行离心柱上DNA酶消化以去除RNA样品中微量DNA污染,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,可以购买各种商品化的RNase free DNase直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA,然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。客户可根据需要向本公司购买去蛋白液RW1。
 
以Qiagen RNase free DNase set 举例(Qiagen货号:79254)
A: DNase I 储存液的配制:
将DNase I干粉(1500Kunitz单位)溶解在550μl RNase-free水中,轻柔混匀,分装后-20℃贮存(可保存9个月)。注意从-20℃融化后的DNase I储存液保存4℃(可保存6周),不要再次冻存。
 
B: DNaseDNase I工作液的配制:
取10μl DNase I储存液加70μl RDD(产品中附带)溶液,轻柔混匀。
 
操作步骤:
1. 前面按照正常步骤操作,在步骤3完成后按照以下步骤操作。
2. 向吸附柱RA中加入350μl 去蛋白液RW1,12,000rpm 离心30-60秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
3. 向吸附柱RA中央加入80μl的DNase I工作液,室温放置15分钟。
4. 向吸附柱RA中加入350μl 去蛋白液RW1,12,000rpm离心30-60秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
5. 接漂洗液RW步骤等后续步骤。