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miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 CC5…

产品编号: CC53501

产品包装: 50次

产品价格: 860元

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  • 产品简介
  • 使用说明
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miRNA荧光定量PCR检测试剂盒

组成
CC53501
2×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)
1.25ml
Reverse primer(10μM)
55μl

 
 
 
 


产品组成、储存:
-20℃,避光保存至少6个月,使用前充分融解混匀。2×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在4℃,避免反复冻融。Reverse primer(10μM)每次用完置-20℃保存。
 
制品说明:miRNA 荧光定量PCR检测试剂盒采用本试剂盒采用SYBR® Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA荧光定量检测的所有试剂,包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix(含Sybr Green)是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的 DNA polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式,配合特殊的Buffer体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。
 
注:该试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(CC53401)配套使用。
 
需自备的试剂:
1. 分子生物学实验级别的水(无核酸酶)
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物(Forward primer)

Forward Primer
设计原则:
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA序列为基础,将U替换成T,这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm值为65℃,设计上游引物的Tm值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过低,可以在引物的5’端添加几个碱基(最好为G或C碱基);也可以在3’端添加1个或几个A碱基;或者5’端和3’端同时修饰。
5. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过高,可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。
 
注意事项:
1. miRNA第一链cDNA的加入量不要超过real time PCR体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(10倍或者100倍)。
3. 本品中含有荧光染料Sybr Green I,保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4. 2×miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,配套ROX产品货号为CC318 Rox Reference Dye。

 操作步骤:

1. 在室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μM)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。如果试剂没有
混匀,其反应性能会有所下降。注:请不要使用振荡器混匀。
3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制

Components
Volumn
Final Concentration
2×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)
25μl
10μl
Forward primer(10μM)
1μl
0.4μl
0.2μM
Reverse primer(10μM)
1μl
0.4μl
0.2μM
miRNA第一链cDNA
xμl
xμl
ddH2O to final volume
50μl
20μl