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Pfu DNA Polymerase(with high …

产品编号: CC51601 / CC51602

产品包装: 500u/3000u

产品价格: 260元/1200元

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 Pfu DNA Polymerase(with high pure dNTP mix)含超纯dNTP


产品组成、储存、浓度:

组成
CC51601
CC51602
Pfu DNA Polymerase
500u
3000u
10×Pfu Buffer+(with MgSO4
1ml
6×1ml

 
                                           
 
 

储存:-20℃保存。浓度:5U/µl
 
制品说明:Pfu DNA Polymerase是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase基因的大肠杆菌中分离纯化的,Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性,能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNAPolymerase 中出错率最低的。其PCR产物为平端,可直接用平端载体克隆。
 
活性单位:1单位(U)Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30 分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物,将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:SDS-PAGE检测纯度大于 99%,经检测无外源核酸酶活性; PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。
 
酶贮存缓冲液:50mM Tris-HCl(pH8.2),0.1mM EDTA,1mM DTT,Stabilizers,50%glycerol。10×Pfu Buffer (含Mg2+):200 mM Tris-HCl (pH8.8),100 mM KCl,100mM(NH4)2SO4,20mM MgSO4,其他成分。
 
适用范围:用于DNA的高保真扩增,,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和平末端补平等。

 

注意事项:
(1) Pfu酶具 3′-5′的外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,建议Pfu酶的延伸速度为每分钟1kb 如扩增片段小于4kb;延伸速度为每分钟0.5 kb 如扩增片段大于4kb。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物,所以应先加 dNTP后,再加Pfu酶到反应体系中,并立即进行 PCR 反应。
(2) 用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,Tm在55-80℃之间,引物浓度在0.1-0.5μM 之间,比Taq酶略高。
(3) Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。