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第一链耐热反转录试剂盒THERMOsc…

产品编号: CC53101 / CC53102

产品包装: 50次/100次

产品价格: 900元/1700元

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THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit
第一链耐热反转录试剂盒
产品储存
:-20℃保存,有效期12个月

制品说明:本制品以RNA为模板,用THERMOscript HˉRTase/RI Mix、2×RT Reaction Mix高效合成第一链cDNA,操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶 THERMOscript HˉRTase。同时经过多点突变,提高了反转录温度耐受性,可以在45-55℃进行反转录。野生型的M-MuLV包含RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。同时更高的反转录温度大大的提高了GC含量高,二级结构丰富的 RNA 模板的反转录效率。

适用范围:第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

特点:合成cDNA片段长度最高可达12kb。

2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP),50℃孵育50min。
如用Oligo(dT)18在55℃反转录,首先应该42℃孵育5min,然后55℃孵育50min。
如用Random Primer,25℃孵育10min,50℃孵育50min。
3. 65℃加热15min失活THERMOscript HˉRTase。
注意:GC含量高(>50%)或者二级结构复杂模板,可以提高反转录温度至55℃左右。
 
RT-PCR
建议取1/10-1/5体积(2-4μl)的反转录产物作为PCR模板。


 

注意事项:
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。