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聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 Ai…

产品编号: CC9764

产品包装: 50次

产品价格: 380元

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  • 使用说明
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试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成 

保存

50次

平衡液

室温

5ml

Binding Buffer

室温

100ml

Diffusion Buffer

室温

30ml

漂洗液WB 

室温

15ml

第一次使用前按说明加指定量乙醇

洗脱缓冲液EB

室温

15ml

吸附柱EC

室温

50个

收集管(2ml)

室温

50个

按照指定温度储存,12 个月内不影响使用效果。

 

 

储存事项:避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

 

 

 

产品介绍:本试剂盒采用新型硅基质膜离心柱及特殊的缓冲液系统,可从聚丙烯酰胺凝胶中简捷高效回收20bp-500bp的短片段DNA片段,回收效率可高达85%。并可最大限度去除杂质,获得高纯度的DNA,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。

 

 

 

 

特点:

 

    1. 适用范围广泛,可以回收20bp-2kb的单链或者双链DNA。

    2. 使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

    3. 独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。

    4. 快速、方便离心柱型,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。

 

 

注意事项

 

    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

    2. 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

    3. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。

    4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。也可以选择可见光染料染色后在可见光下切胶会避免紫外对DNA损伤。

    5. 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始DNA量和洗脱体积有关。

 

 

平衡液的使用

 

    1. 介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。

 

 

    2. 什么情况下使用:一般刚买来23个月的新硅胶柱子不需要使用平衡液。时间存放较长吸附效率降低的硅胶柱子,可使用平衡液进行预处理来提高硅胶柱子结合能力从而提高核酸产量。或者预期片段难回收,或者回收起始量低预期产量低的情况,也可使用平衡液来提高回收效率。

 

 

 

 

    3. 使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100ul的平衡缓冲液至柱子中。13,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

 

 

 

 

操作步骤
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
 
1. 切取含DNA片段的PAGE凝胶(100mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入1.5mL离心管中,用移液枪头尽可能捣碎(最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。
 
2. 向凝胶中加入1-2倍体积的Diffusion Buffer(如100mg凝胶加入100-200ul Diffusion Buffer),55℃温浴30分钟-2小时,期间每15分钟涡旋震荡混匀,促进胶中DNA扩散到溶液中。
一般来说,回收片段越大,DNA扩散需要的时间越长,100bp左右的DNA片段温浴30分钟就可以(时间长些也不影响回收效果);如果回收500bp-1000bp的DNA片段,可以将温浴时间延长3-5个小时。也可以37℃温浴12-16小时过夜。
 
3. 12,000rpm离心5分钟。小心取上清转入新的离心管。记录上清体积。
 
4. 加入9倍上清体积的Binding Buffer,混匀。
回收片段>100bp时,加5倍上清体积的Binding Buffer即可。
 
5. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
吸附柱最大容积为750ul,若溶液体积大于750ul,可分批加入。
 
6. 加入600ul漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
7. 重复步骤6一遍。
 
8. 将吸附柱EC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
9. 取出吸附柱 EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50ul洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。如果需要较高浓度核酸,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于25ul,体积过小降低核酸洗脱效率,减少产量。