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CTAB大量植物基因组DNA快速提取试…

产品编号: CC9780

产品包装: 10次

产品价格: 800元

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

适用范围:适用于快速提取植物基因组DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
10
裂解液PL
室温
100ml
结合液PQ
室温
80ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
抑制物去除液IR
室温
100ml
漂洗液WB
室温
25ml×2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
15ml×2ml
吸附柱AC
室温
10个
收集管(50ml)
室温
10个

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
 
储存事项:
    1. 裂解液PL、结合液PQ或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
    改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
    1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
    2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
    3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在 1 小时内完成。
4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
 
注意事项:
    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到9,000xg,可容纳50ml离心管的台式离心机。
    2. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
    3. 需要自备氯仿/异戊醇(体积比24:1混合)、无水乙醇和β-巯基乙醇。
   4. 结合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    5. 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25ug。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保PH大于7.5,PH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,PH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
 

 

标准操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
²        第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
²        取所需适量裂解液 PL 放置在 65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。
 
1. 取适量植物组织(新鲜组织1-2克或干重组织0.3-0.4克)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
 
2. 转移细粉到一个50ml离心管,不要解冻,加10ml 65℃预热的裂解液PL(确认已加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
 
3. 65℃水浴30-60分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
可选:如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。如果RNA残留多,可在水浴前加入100ul RNA酶(20mg/ml)。
 
4. 加入10ml氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),9,000xg以上离心10分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第4步前用等体积酚/氯仿(1:1)抽提一遍。
 
5. 小心吸取上清到一个新的50ml离心管,注意不要吸到界面物质。
如上清比较浑浊,则需要重复步骤4 一遍,直到得到透亮上清。
 
6. 较精确估算上清量,加入1.5倍体积结合液PQ(请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
 
7. 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)静置2分钟,9,000xg离心2分钟,倒掉收集管中的废液(每次最多可加20ml混合物离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
 
8. 加入10ml抑制物去除液IR,9,000xg离心2分钟,弃废液。
 
9. 加入10ml漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),9,000xg离心2分钟,弃掉废液。
 
10. 重复操作步骤9一遍。
 
11. 将吸附柱AC放回空收集管中,最高速(最好大于9000xg,如果离心机转速低,需要相应延长离心时间)离心10-15分钟以干燥膜基质残留乙醇,用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇,室温或者烘箱晾干几分钟。
该步骤目的为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率,降低DNA产量。如果洗脱产量低,则必须加做步骤12。
 
12. 可选步骤:选择以下两种方法之一干燥柱子:
    1) 取下柱子放置于真空容器中,密封真空容器,提供真空15分钟;
    2) 将柱子放置于60-65℃真空干燥箱或烘箱中,放置10-15分钟。
13. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1.5-2ml洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5分钟,9000xg离心4-5分钟。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心2分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于1ml,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
14. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。