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新型大量植物DNA快速提取试剂盒 …

产品编号: CC9771

产品包装: 10次

产品价格: 900元

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

适用范围:适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
10
RNase A(10mg/ml)
-20℃
500ul
缓冲液AP1
室温
50ml
缓冲液AP2
室温
20ml
缓冲液AP3/E
室温
40ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
漂洗液WB
室温
25ml×2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
20ml
吸附柱AC
室温
10个
收集管(50ml)
室温
10个

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
 
储存事项:
    1. 裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3/E加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
    该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在 1 小时内完成。
4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于 PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
 
注意事项:
    1. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
    2. 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    3. 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般1g新鲜组织典型产量可达30-260ug。
4. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保PH大于7.5,PH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,PH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
 

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
²        第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
²        第一次使用前请先在缓冲液 AP3/E 中加入指定量无水乙醇!
²        将缓冲液AP1在65℃水浴预热。
 
1. 取适量植物组织(最大处理量不超过新鲜组织1g或干重组织200mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
 
2. 转移细粉到一个15ml离心管,不要解冻,加入5ml缓冲液AP1(已经65℃预热)和40ul RNase A(10 mg/ml),旋涡振荡,充分混匀帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解可选:多糖含量特别高的时候可以在AP1加入2%PVP40,000;多酚含量特别高的时候可以在AP1中加入0.2% beta巯基乙醇。也可两者同时加入。
 
3. 65℃水浴10-15分钟,在水浴过程中颠倒离心管2-3次,混合样品。
 
4. 加入1.8ml缓冲液AP2,充分混匀,冰上放置10分钟,9,000xg室温离心10分钟,小心吸取上清到一个新的50ml离心管,注意不要吸到界面物质。
如果没有高速离心机,也可以4,000-5,000xg离心,适当延长时间即可。
 
5. 计算上清量,加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!),立即涡旋振荡混匀。
加入AP3/E可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即涡旋振荡混匀。
 
6. 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)3,000-5,000xg离心5分钟,倒掉收集管中的废液。
 
7. 加入10ml漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),3,000-5,000xg离心4分钟,弃掉废液。
 
8. 加入10ml漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),3,000-5,000xg离心3分钟,弃掉废液。
 
9. 将吸附柱AC放回空收集管中,最高速(最好大于9,000xg,如果离心机转速低,需要相应延长离心时间)离心10分钟以干燥膜基质残留乙醇,用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇,室温或者烘箱晾干几分钟。
 
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1-2ml洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液可事先在65-70℃水浴中预热),室温放置5分钟,3,000-5,000xg离心3分钟,得到DNA。此外将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟后再洗脱一遍,可以提高浓度和产量。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于500ul,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
11. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
问题与解决方法

问题
评论与建议

DNA产量低
*处理材料过量或者裂解不完全-建议:使用适量的起始材料,充分研磨或者匀浆
*结合条件不恰当-建议:步骤5精确估计上清量,加入1.5倍体积 AP3/E量要准确
RNA残留
*植物RNA含量太丰富-建议:提高RNase A处理浓度
未提取到DNA
*漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议:第一次实验时,在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇

离心柱堵塞
*研磨裂解不充分,团块多;裂解物太粘稠;离心力太小-建议:参见步骤2,加一个离心步骤去除;减低起始材料量,不要处理过量,加大离心力
洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留

*漂洗次数不够-建议:步骤8完成后,加10ml乙醇再漂洗一遍
*起始材料太多过量-建议:减少起始处理材料,不要过量
 
洗脱下来的DNA
产量低
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议:确保做了步骤9,否则残留乙醇会影响洗脱效率
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液-建议:仔细阅读步骤10和注意事项4和只使用洗脱缓冲液EB洗脱
*洗脱缓冲液量偏低--建议:使用2ml洗脱缓冲液洗脱
A260吸光值异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了吸光值-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用


DNA下游酶切不能
切开或者酶切不完全
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议:确保做了步骤9,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发