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凋亡小体/hoeschst染色试剂盒  C…

产品编号: CC9791

产品包装: 100次

产品价格: 260元

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  • 产品简介
  • 使用说明
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试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
100
固定液
4℃
50ml
100×染色浓缩液
4℃避光
0.5ml
染色稀释缓冲液
4℃或者室温
50ml

本产品收到后按照上面指示温度存放各成份,6个月内有效。
 
产品介绍:
    凋亡中晚期细胞形态学变化为染色质在局部区域凝集,固缩,继而核碎裂出现凋亡小体。在Hoeschst染色下,细胞核或者凋亡小体的DNA会呈现致密浓染或者碎块状致密浓染。本试剂盒Hoechst染料紫外光激发波长350-370nm;发射波长465nm,在荧光显微镜下DNA发出蓝色荧光。
 
注意事项:
    1. 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
    2. 需PBS或0.9% NaCl溶液,盖玻片与载玻片。
    3. 荧光容易淬灭,应该尽量避光操作和保存。
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
1. 贴壁细胞
   1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9% NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。
   2) 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
 本试剂盒使用固定液主要为 44%多聚甲醛,如果不适合您的细胞或者效果不佳,很多种固定配方如细胞固定液『甲醇:冰乙酸(3∶1)现配』,都可以使用,可以根据自己细胞特点选用适合的固定方法。
   3) 去固定液,用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。
   4) 取5ul 100×染色浓缩液与0.5ml染色稀释缓冲液混合后加入染色5-10分钟,也宜用摇床,或手动晃动数次。
   5) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。
   6) 滴一滴封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左右。
封片液可使用50%PBS/50%甘油(等体积混合),如果荧光淬灭太快影响观察,应该选用商品化的抗荧光淬灭封片液。
 
2. 悬浮细胞
   1) 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内,加入0.5ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
   2) 离心去固定液,用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
   3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ul液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。
   4) 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
   5) 取5ul 100×染色浓缩液与0.5ml染色稀释缓冲液混合后均匀滴上染色5-10分钟,用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
   6) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。
   7) 和贴壁细胞一样封片观察。
 
3. 组织切片
   1) 对于任何常见切片,处理至常规可以进行免疫染色时,或完成常规的免疫染色后,即可进行后续的Hoeschst染色。
   2) PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
   3) 取5ul 100×染色浓缩液与0.5ml染色稀释缓冲液混合后加入染色5-10分钟,也宜用摇床,或手动晃动数次。
   4) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍,每次3分钟。

   5) 和贴壁细胞一样封片观察。