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Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒  …

产品编号: CC9792

产品包装: 20次、50次

产品价格: 860元/1560元

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保存条件:2-8℃储存,有效期一年。
 
说明:
    细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的           磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
    Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。
 
产品组成(50/25次反应):
    · Annexin V-FITC           500ul/250ul(20ug/ml)
    · Binding Buffer           40ml /20ml
    · Propidium Iodide (PI)    250ul/125ul(50ug/ml)
 
注意事项:
    1. 为保证得到理想的实验结果,在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项;
    2. 试剂(尤其是小瓶装的试剂)在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落;
    3. Propidium iodide(PI)能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用;
    4. 此试剂盒仅供科研使用,不宜用于临床诊断;
    5. 本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送,并非试剂盒的真正组成成分;细胞的洗涤同常规方法。
 
操作注意要点:
    1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作;
    2. 反应完毕后请尽快检测,因为细胞凋亡是一个动态的过程,反应1小时后荧光强度就开始衰变;
    3. Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质,在操作时请注意避光;
    4. 成功的检测凋亡受以下几种因素的影响,如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等,把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的;
    5. 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果;
    6. PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,上机前5分钟再加入PI染色。

 

操作步骤:
1. 贴壁细胞,先用胰酶消化;
 
2. 细胞计数后取5×105~1×106个/ml细胞,1000rpm,4℃离心10分钟,弃上清;
   
3. 加入1ml冷的PBS,轻轻震荡使细胞悬浮;
 
4. 1000rpm,4℃离心10分钟,弃上清;
   
5. 重复步骤3、4两次;
   
6. 将细胞重悬于200ul Binding Buffer;
   
7. 加入10ul Annexin V-FITC 轻轻混匀,避光室温反应15分钟或4℃反应30分钟。
   
8. 加入 300ul Binding Buffer(总反应体积500ul)以及5ul PI,在1小时内上机检测;(建议在加入PI之前将细胞悬液用200目筛网过滤。)
   
9. 若用荧光显微镜检测,将细胞混合液离心,取细胞沉淀涂片,再进行观察。