• 400电话

    400-6345-876

  • 固定电话

    027-87388389

  • 移动电话

    18995514293 18971188977

  • 传    真

    027-87388389

  • 地    址

    武汉市洪山区狮子山街张吴村华大家园(华师教师还建住宅小区)A4栋1单元602室

  •   合肥分公司

  • 合肥电话

    0551-63646173

  • 移动电话

    18963781346

  • 合肥地址:

    合肥市蜀山区槽郢路微商学院14号4栋2单元203室

微量/临床样品基因组DNA快速提取…

产品编号: CC9797

产品包装: 50次

产品价格: 1050/1150元(带蛋白酶K)

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

适用范围:适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
50
裂解液ML
室温
11ml
结合液CB
室温
15ml
抑制物去除液IR
室温
25ml
漂洗液WB
室温
10ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
Carrier RNA
-20℃
310μg
洗脱缓冲液EB
室温
10ml
蛋白酶K粉(可选)20mg/ml
-20℃
20mg
吸附柱AC和收集管
50套

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果
 
储存事项:
    1. 结合液CB或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 为避免降低活性,方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存,-20℃保存。
    3. Carrier RNA 收到时为冻干粉状,使用前按照注意事项4配制和储存。
    4. 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。仔细阅读注意事项4。
 
产品介绍:
    本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统,特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR分析。
 
产品特点:
    1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
    2. 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
    3. 配备了Carrier RNA用于充分收集特别微量DNA。
    4. 多次柱漂洗确保高纯度,提取的DNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括 PCR、酶切、测序、Southern杂交等。
 
注意事项:
    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
    2. 开始实验前将需要的水浴先预热到所需温度备用。部分样品需要准备1M DTT。
    3. 结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    4. Carrier RNA
       1) Carrier RNA收到时为冻干状,使用时加入310μl RNase free水充分溶解,配制成1μg/μl溶液。Carrier RNA溶液应避免反复冻融,冻融次数不能超过3次。所以建议在第一次使用时按自己每次的用量分装在RNase-free的离心管中后置于-20℃储存。
       2) Carrier RNA使用方法:如果起始处理量很少(例如小于10μl全血和法医样品),我们推荐使用Carrier RNA,如果预期有较大量DNA产量,用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取          所需结合液CB中加入1μl Carrier RNA储存溶液,将结合液CB与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
       3) Carrier RNA加入过多造成DNA洗脱液中Carrier RNA浓度过高,下游PCR反应可能受干扰,加入过少可能并不能帮助提高DNA产量和PCR敏感度,因此加入量应该在具体试验中调整以得到最佳效果。
       4) 由于Carrier RNA本身是小核酸,所以得到的基因组测定OD260值会比真实值偏大,建议将得到的基因组直接用PCR进行检测。

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 血液样品
   a. 取1-100μl血液到1.5ml的离心管中。
   b. 如果不足100μl,加入裂解液ML补足到100μl。
   c. 加入10μl的蛋白酶K(20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入100μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在70℃放置10分钟。
   如果处理样品<10μl,建议在100μl结合液CB中加入1μl Carrier RNA储存溶液。
   d. 冷却后加入50μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,室温放置3分钟。
   如果周围环境高于25℃,,乙醇需要冰上预冷后再加入。
   e. 接操作步骤项下7。
 
2. 干血点
   a. 用打孔机打孔的方法在血卡(上面有干血点)上冲取 3mm(1/8英寸)直径血卡小片(上面有干血点),最多将3个直径3mm血卡小片放入1.5ml的离心管中。
   一般血液应该点在特定纸或者血卡上面干燥,如903 paper or IsoCode paper(Schleicher&Schuell),BloodstainCard or FTA Card (Whatman),Guthrie test cards, or comparable blood cards.
   b. 加入180μl裂解液ML。
   c. 加入20μl的蛋白酶K(20mg/ml)溶液,立刻涡旋振荡充分混匀。
   d. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
   如果没有可加热轨道摇床,可以在水浴或者heating block上面进行,每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
   e. 加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀。
   如果只处理一个3mm血卡小片,建议在200μl结合液CB中加入1μl Carrie RNA储存溶液。
   f. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇10分钟。
  如果没有可加热轨道摇床,可以在水浴或者heating block上面进行,每3分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
   g. 接操作步骤项下7。
 
3. 组织样品
   a. 新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块(切成微块可以提高产量)后取<10mg,转入装有180μl裂解液ML的1.5ml离心管中,用大口径枪头吹打混匀。
   b. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
   c. 将裂解物放置在56℃水浴过夜或者直到组织消化完全,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
   对于小量的组织,一般 44-66 小时即可,但是过夜消化可以得到最佳结果。
   d. 加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀。
   如果处理样品量少,建议在200μl结合液CB中加入1μl Carrier RNA储存溶液。
   e. 冷却后加200μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,室温放置5分钟。
   如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
   f. 接操作步骤项下7。
 
4. 口香糖
   a. 将30mg口香糖切成小块放入1.5ml离心管,加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
   b. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇至少3小时。
  如果没有可加热轨道摇床,可以在水浴或者heating block上面进行,每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
   c. 加入200μl结合液CB(加入1μl Carrier RNA),立刻涡旋振荡充分混匀。
   d. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
  如果没有可加热轨道摇床,可以在水浴或者heating block上面进行,每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
   e. 冷却后加200μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
   f. 最高速(约 14,000rpm)离心1分钟,取上清加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
   g. 接操作步骤项下8。
 
5. 法医材料
   a1. 剪下1cm2烟头或者过滤嘴外层纸,切成6小块放入1.5ml离心管,加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
  a2. 剪下0.5-2.5cm2信封或者邮票,切成小块放入1.5ml离心管,加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   a3. 从毛发根部毛囊处开始剪下0.5-1cm长度毛发放入1.5ml离心管,加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液,立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   a4. 将指甲剪成小块放入1.5ml离心管,加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液,立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
  a5. 将约0.5cm2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小块放入1.5ml离心管,加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)(如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液),立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
 
   b. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
   如果没有可加热轨道摇床,可以在水浴或者heating block上面进行,每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
   一般毛发1小时裂解可以完成,如果不完全可以延长时间。指甲等难裂解物建议过夜裂解。最后没有裂解的不溶物在后续步骤e中会通过离心去除。
   c. 加入200μl结合液CB(加入1μl Carrier RNA),立刻涡旋振荡充分混匀。
  d. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
   e. 最高速(约14,000rpm)离心1分钟,取上清加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
   f. 接操作步骤项下8。
 
6. 微切割样品(包括福尔马林固定的微切割样品)
  a. 加入15μl裂解液ML到0.2ml离心管中,放入微切割样品。
   b. 加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
   c. 56℃水浴3小时(福尔马林样品16小时)至裂解完全,中间不时颠倒涡旋。
   d. 加入15μl裂解液ML,再加入50μl结合液CB(加入1μl Carrier RNA),立刻涡旋振荡充分混匀。
   e. 冷却后加入50μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,室温放置5分钟。
   如果周围环境高于25℃,,乙醇需要冰上预冷后再加入。
   f. 接操作步骤项下 7。
 
7. 将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
 
8. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心30秒,弃废液。
 
9. 加入500μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
10. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
11. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
12. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加20-50μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置2-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
13. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
 
问题与解决方法

问题
评论与建议
 
 

 
DNA产量低
或者
洗脱液
中无DNA
*Carrier RNA没有加入到结合液CB-建议:仔细阅读注意事项4
*样品冻融超过1次-建议:尽量使用新鲜样品和冻融不超过1次的样品
*样品在室温放置过久-建议:尽快处理样品或者低温适当方式保存
*裂解不完全,蛋白酶K失效了-建议:收到蛋白酶K后,按照每次使用量分装冻存,避免反复冻融
*结合液CB和Carrier RNA没有充分混匀-建议:充分颠倒混匀
*试剂和样品没有充分混匀-建议:加入每个试剂后都要充分混匀
*洗脱效率不高-建议:确保做了步骤1,否则残留乙醇会影响洗脱效率,仔细阅读步骤12和只使用洗脱缓冲液EB洗脱
 


DNA的下游
反应
如PCR
效果不佳
*DNA产量低或者洗脱液中无DNA-建议:在下游反应中增加DNA用量
*洗脱液中太多或者太少的Carrier RNA-建议:确定在下游应用中Carrier RNA的最大允许量,调整结合液CB中加入Carrier RNA的用量。仔细阅读注意事项4
*降低的灵敏度-建议:确定在下游PCR应用中DNA洗脱液的最大允许用量,减少或者增加DNA洗脱液在PCR反应中的用量,DNA洗脱体积也可以相应的调整
 
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议:确保做了步骤11,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用
A26吸光值
异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了吸光值-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用