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DNAzol基因组DNA快速提取试剂  C…

产品编号: CC9799

产品包装: 50ml、100ml

产品价格: 350元/600元

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  • 产品简介
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产品介绍:DNAzol是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30分钟,DNA回收率可达70-100%,得到的DNA不需再纯化,可直接用于Southern杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR反应和其他分子生物学应用。
 
产品储存:室温保存至少一年。
 
注意事项:DNAzol有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
1. 裂解,匀浆
   a. 组织:25-50mg组织加1ml DNAzol,使用匀浆仪处理5-10次。少量(5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打混匀,室温放置5-10分钟。
   b. 细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol用取样器吹打几次混匀。每10cm2细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。
   c. 细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复吹打混匀。
   以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。
 
2. 离心
   4-25℃,10000g离心10分钟。将得到的上清转入新管。
   此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA的DNA时,可加此步骤。其他样品可省略此步。
 
3. 沉淀
   每使用1ml DNAzol加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8次,混匀样品至出现DNA沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4-25℃,4000g离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。
 
4. 漂洗
   用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA两次。漂洗时,将DNA悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6次,然后静置0.5-1分钟使DNA沉降到管底,尽可能吸弃上清。
   如果需要,可在4-25℃,1000g离心1-2分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。
 
5. 溶解
   用枪吸去残余的乙醇,晾干几秒钟后立刻用8mM NaOH溶解DNA(DNA暴露于空气几秒钟都会大大加大溶解难度,因此乙醇晾后立刻溶解)。可将沉淀吸到大口径枪头中缓慢通过数次来帮助溶解。TE缓冲液和水溶解效果不完全,因此建议用碱溶液,可更快速且彻底的溶解。通常,从107细胞或10-20mg动物组织中提取的DNA可用0.2-0.3ml 8mM NaOH溶解,使DNA浓度约为0.2-0.3ug/ul。
   如果从植物、肝脏、肌肉等富含糖原的材料提取DNA,最后可能会有一些残留物(多糖)无法溶解,可以用12,000Xg离心10分钟去除。
   8mM NaOH容易被空气氧化,应该用不超过6个月的2-4mol的NaOH储存液,每月配制一次。
 
6. 结果检测
   以8mM NaOH溶液溶解的DNA(用DNAzol提取的DNA在Tris缓冲液中溶解效果不好)在紫外分光光度计检测 A260/A280,A260为1相当于50ug双链DNA/ml。得到的A260/A280 应为1.6-1.9,片段大小为20-100kb。得到的DNA片段大小取决于提取过程中机械外力对DNA的破坏程度。