• 400电话

    400-6345-876

  • 固定电话

    027-87388389

  • 移动电话

    18995514293 18971188977

  • 传    真

    027-87388389

  • 地    址

    武汉市洪山区狮子山街张吴村华大家园(华师教师还建住宅小区)A4栋1单元602室

  •   合肥分公司

  • 合肥电话

    0551-63646173

  • 移动电话

    18963781346

  • 合肥地址:

    合肥市蜀山区槽郢路微商学院14号4栋2单元203室

固定包埋组织DNA快速提取试剂盒 …

产品编号: CC9711

产品包装: 50/50次带蛋白酶K粉、…

产品价格: 340/440元(带蛋白酶K)、540/740元(带蛋白…

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

包装单位50/50次(带蛋白酶K粉)100次/100次(带蛋白酶K粉)200次/200次(带蛋白酶K粉)

产品价格: 340/440元(带蛋白酶K)、540/740元(带蛋白酶K)

适用范围:适用于快速提取各种福尔马林固定和石蜡包埋组织DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
50
100
200
裂解液FTL
室温
11ml
20ml
40ml
结合液CB
室温
11ml
20ml
40ml
抑制物去除液IR
室温
25ml
50ml
100ml
 
室温
15ml
25ml
50ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
15ml
15ml
15ml×2
蛋白酶K粉(可选30mg/ml)
-20℃
20+10mg
3×20mg
6×20mg
收集管(2ml)
室温
50个
100个
200个
吸附柱AC
室温
50个
100个
200个

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果
 
储存事项:
    1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 为避免降低活性、方便运输,提供蛋白酶 KK 为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,10mg/20mg加入0.5ml/1ml灭菌水溶解,因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存,-20℃保存。
    3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
    福尔马林固定或者石蜡包埋组织通过独特裂解液热处理和蛋白酶K共同作用迅速裂解细胞释放出基因组DNA,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
    1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
    2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
    3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
    4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
 
注意事项:
    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
    2. 需要自备乙醇(需要准备100%/80%/60%/40%不同浓度)或者二甲苯。
    3. 实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
4. 结合液CB和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。


 

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 将组织切片放入离心管子,浸泡在二甲苯中脱蜡约30分钟(具体时间根据切片厚度调整)。
 
2. 将切片依次放入100%乙醇/80%乙醇/60%乙醇/40%乙醇/去离子水,每个液体中浸泡10秒钟重新水化切片。
刚放入100%乙醇时,应该见到切片变白。
 
3. 显微镜观察下,用刀片切下拟提取DNA的目标组织,放入预先称重的1.5ml离心管。再次称重,计算出切片组织重量。
 
4. 在25-50mg组织中加入200μl裂解液FTL,再加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立即混匀混匀后置37℃水浴过夜。
 
5. 再加入10μl的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml),混匀后55℃水浴1-2小时。
此步骤后,不应该见到粗大的组织颗粒了。
 
6. 加入200μl结合液 CB,立刻涡旋振荡20秒充分混匀后置70℃水浴10分钟。
 
7. 冷却后加入100μl异丙醇,立刻涡旋振荡30秒充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
 
8. 用1毫升的枪头吸取混合物,将混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头,可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物;如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去,该做法是为了去除不溶物,以免堵塞离心柱。
 
9. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心30秒,弃废液。
 
10. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
11. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
12. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
13. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
14. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
附录:另外一种脱蜡方式
1. 将目标组织切片放入离心管,加入1ml 100%二甲苯,涡旋振荡10秒。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。
 
2. 50℃水浴3分钟熔解石蜡,20-25℃最高速离心2分钟,收集组织到管底。
 
3. 小心用移液器吸弃上清二甲苯,注意不要吸到沉淀。
 
4. 加入1ml无水乙醇,涡旋振荡,最高速离心2分钟,小心吸弃上清乙醇。
 
5. 加入1ml无水乙醇,重复步骤6一遍,尽可能吸弃所有乙醇。
 
6. 室温或者37℃晾干乙醇10分钟或直到所有乙醇挥发干。
 
问题与解决方法

问题
评论与建议
 
 
 


DNA产量低
*组织块太大,蛋白酶K消化不完全-建议:液氮研磨或者尽量将组织切成小块,或者延长蛋白酶K消化时间至过夜或者在原有消化基础上另加20μl蛋白酶K消化1-2小时
*蛋白酶K失效了-建议:收到蛋白酶K后,按照每次使用量分装冻存,避免反复冻融
*裂解不完全或者和异丙醇没有充分混匀-建议:加入结合液后,和加入蛋白酶K后立即吹打或者涡旋混匀;加入异丙醇后立即吹打或者涡旋混匀才加入吸附柱,如果太粘稠必须涡旋振荡15秒充分混匀
组织DNA降解了
*组织中核酸酶活性导致降解-建议:样品处理前妥善保存在-20℃,处理量不要过量
未提取到DNA
*漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议:第一次实验时,在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇
 
洗脱下来的
DNA产量低
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议:确保做了步骤12,否则残留乙醇会影响洗脱效率
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液-建议:仔细阅读仔细阅读注意事项5和步骤13和只使用洗脱缓冲液EB洗脱
A260吸光值
异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了吸光值-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用
 
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议:确保做了步骤7,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发