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海洋动物组织基因组DNA快速提取试…

产品编号: CC9739

产品包装: 50次、100次

产品价格: 320/420元(带蛋白酶K)、520/720元(带蛋白…

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  • 产品简介
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产品包装:50次、100次
产品价格:320/420元(带蛋白酶K)、520/720元(带蛋白酶K)
 
适用范围:适用于快速提取各种海洋动物组织基因组DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
50
100
200
裂解液SL
室温
11ml
20ml
40ml
结合液CB
室温
11ml
20ml
40ml
抑制物去除液IR
室温
25ml
50ml
100ml
漂洗液WB
室温
15ml
25ml
50ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
15ml
15ml
15ml×2
蛋白酶K粉(可选)20mg/ml
-20℃
20mg
2×20mg
4×20mg
吸附柱AC
室温
50个
100个
200个
收集管(2ml)
室温
50个
100个
200个

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果
 
储存事项:
    1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 为避免降低活性、方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,加入1ml灭菌水溶解,因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存,-20℃保存。
    3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
    独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
 
注意事项:
洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
    提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
 
1. 切取不多于30mg的组织材料,放入装有180μl组织裂解液SL的1.5ml离心管中,涡旋振荡15秒。
根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难,可先用液氮研磨。
 
2. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。将裂解物放置在 55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全。
不同组织裂解时间不同,通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全,虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15秒。
可选做步骤: 如果RNA残留较多,需要去除RNA,可在完成步骤2后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
 
3. 加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置10分钟。
 
4. 冷却后加100μl异丙醇,充分颠倒或涡旋振荡充分混匀,此时可能出现絮状沉淀。
 
5. 将上一步混合物和可能的沉淀都加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头,可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物;如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去,该做法是为了去除不溶物,以免堵塞离心柱。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
 
6. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心30秒,弃废液。
 
7. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
8. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
9. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
11. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。