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尿液基因组DNA快速提取试剂盒  C…

产品编号: CC9742

产品包装: 50次

产品价格: 450/550元(带蛋白酶K)

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
50
缓冲液UB
室温
10ml
结合液CB
室温
15ml
抑制物去除液IR
室温
25ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
漂洗液WB
室温
室温
洗脱缓冲液EB
室温
15ml
蛋白酶K粉(可选)20mg/ml
-20℃
20mg
吸附柱AC
室温
50个
收集管(2ml)
室温
50个

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
 
储存事项:
    1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 为避免降低活性,方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,加入1 毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存,-20℃保存。
    3. 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
尿液中DNA来自于尿道中脱落的细胞,用尿液DNA进行分子生物学基础研究和临床诊断有很多特殊的优点:1)尿液收集物是非介入、无创伤性的。2)从尿液中提取DNA要比从血液中提取DNA更加简单。本产品就是专门用于从尿液中提取基因组DNA的产品,提取的DNA可直接用于PCR反应。本产品具有下列特点:1.操作简单,整个过程室温操作约20分钟,适合大规模样品处理。2.DNA产率女性一般为50-200ng/mL尿液,男性一般为3-50ng/mL尿液。3.所提取的DNA纯净,可直接用于PCR、DNA甲基化鉴定、癌症检测等。4.安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。5.性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。
 
注意事项:
    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
    2. 需要自备异丙醇。
    3. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 取5-50ml尿液,放入适当大小离心管,3,000rpm离心收集细胞沉淀。
 
2. 小心弃上清,加入200μl缓冲液UB重悬细胞。
3. 加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在70℃放置10分钟。溶液应变清亮。
 
4. 冷却后加入100μl异丙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
 
5. 将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
 
6. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心30秒,弃废液。
 
7. 加入500μl漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
8. 加入450μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
9. 将吸附柱 AC 放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加30μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于15μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
11. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。