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CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒…

产品编号: CC9760

产品包装: 50次、100次、200次

产品价格: 400元/640元/1150元

说明书下载
  • 产品简介
  • 使用说明
  • 产品图片

 

适用范围:适用于快速提取植物基因组DNA
 
试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成
保存
50
100
200
裂解液PL
室温
40ml
80ml
75ml×2
结合液PQ
室温
15ml
25ml
25ml×2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
抑制物去除液IR
室温
25ml
50ml
100ml
漂洗液WB
室温
15ml
25ml
25ml×2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
15ml
15ml
40ml
吸附柱AC
室温
50个
100个
200个
收集管(2ml)
室温
50个
100个
200个

本试剂盒在室温储存2个月不影响使用效果。
 
储存事项:
    1. 裂解液PL、结合液PQ或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
    2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
 
产品介绍:
    改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质(根据需要,上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA,进一步去除其它各种杂质),然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
 
产品特点:
    1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
    2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
    3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
    4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。
 
注意事项:
    1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
    2. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
    3. 需要自备氯仿/异戊醇(体积比24:1混合)、无水乙醇和β-巯基乙醇。
    4. 结合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    5. 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25ug。
    6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
    7. 本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积,如果样品DNA含量低或者产量低,需要扩大提取量,还需要另外购买溶液。

 

标准操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
²        第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
²        取所需适量裂解液PL放置在65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。
 
1. 取适量植物组织(新鲜组织100mg或干重组织30mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
 
2. 转移细粉到一个1.5ml离心管,不要解冻,加600ul 65℃预热的裂解液PL(确认已加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
 
3. 65℃水浴20-60分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
可选:如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。如果RNA残留多,可在水浴前加入6ul RNA酶(20mg/ml)。
 
4. 加入700ul氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),13,000rpm离心5分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第4步前用等体积酚/氯仿(1:1)抽提一遍。
 
5. 小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管,注意不要吸到界面物质。
如上清比较浑浊,则需要重复步骤4一遍,直到得到透亮上清。
 
6. 较精确估算上清量,加入1.5倍体积结合液PQ(请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
 
7. 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心 30秒,倒掉收集管中的废液(先加700ul离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
 
8. 加入500ul抑制物去除液IR,12,000rpm离心30秒,弃废液。
 
9. 加入700ul漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
10. 加入500ul漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。
 
11. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
 
12. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100ul洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50ul,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
 
13. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
 
附录(低DNA含量或者产量低样品操作步骤):
1. 取适量植物组织(新鲜组织400mg或干重组织200mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
 
2. 转移细粉到一个15ml离心管,不要解冻,加入9ml 65℃预热的裂解液PL(确认已经加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
 
3. 室温放置60分钟,中间不时颠倒离心管以混合样品数次。
如果组织干燥或者产量低,可以放置在65℃水浴。
 
4. 加4.5ml氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),涡旋充分混匀,3,000g离心10分钟。
 
5. 小心吸取上清到一个新的15ml离心管,注意不要吸到界面物质。重复一遍步骤4。
 
6. 小心吸取上清到一个新的15ml离心管,估算上清量,加入0.7倍体积的异丙醇,涡旋混匀来沉淀DNA。
 
7. 立刻3,000g离心20分钟沉淀DNA,弃上清,颠倒离心管口放在纸巾上控干残留液体,并小心用用移液枪吸干沉淀周围残留液体(不要过于干燥DNA沉淀)。
 
8. 加入300ul-400ul预热到65℃的灭菌水,重新溶解DNA,可能需要在65℃短暂温育帮助溶解,期间不断轻弹管底帮助溶解。
 
9. 加入1.5倍体积结合液PQ(450ul-600ul,请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
 
10. 后续步骤和上面标准操作步骤7开始后完全一样。