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Long Taq DNA Polymerase  CC519…

产品编号: CC51901/CC51902/CC51…

产品包装: 250U/500U/3000U

产品价格: 140元/260元/1200元

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注意事项:

    1. 10×Long Taq Buffer pH值较高,可能会形成[Mg(OH)2]沉淀,使用前要充分溶解,并Votex保证可能的沉淀重新溶解,或者37℃温育5分钟,然后Votex充分混匀。

    2. 扩增长片段强烈推荐使用0.2μl薄壁管。其他试管未经测试。较厚的试管在92℃时不能有效地使模板变性。变性时,尽可能缩短变性时间,降低变性温度。第一步变性在92~94℃下进行2分钟(GC含量高可延长时间达5分钟)。在循环过程中尽可能缩短变性时间(92~94℃下进行10-15秒),除非模板中富含GC,则95℃下变性30秒。这可以防止DNA脱嘌呤和链断裂,对于所需扩增的基因组DNA片段终长度超过12kb时,应该尽可能的降低变性温度和时间。变性需要的时间在不同的PCR仪器上稍有不同。

    3. 如果扩增模板GC含量高或者扩增片段比较长,可在反应混合物中加入DMSO

到终浓度1%-8%,最常用2%(<30kb)或者4%(>30kb)往往会改善扩增效果。

    4. 扩增长片段,引物一般终浓度为0.3-1μM,长度最好为27-36bp;退火温度一般在65℃-70℃,此时退火温度和延伸温度基本一致,可将退火延伸在同一个温度进行,使用2阶段扩增法。当然如果设计的引物在20bp左右,则还是使用传统3阶段扩增法为好。

    5. 模板一般使用0.01-2.5ng(λphage)或者0.1-1μg(Human)。

    6. 1×Long Taq Buffer中镁离子浓度为2.5mM,建议dNTP浓度为400mM,然而要得到最佳结果,优化Mg2+的浓度是必需的。如果含有较高EDTA或者螯合剂,则应该提高Mg2+;如果要增加dNTP浓度,相应也要增加Mg2+浓度。